А. И. Рыхлевская, О. М. Сидоркина, Е. А. Романова, Т. С. Орецкая, Ж. Лаваль, С. А. Кузнецова

Определение контактов фосфатных групп ДНК с нуклеофильными аминокислотами фермента репарации формамидопиримидин-ДНК гликозилазы E. сoli

Для зондирования активного центра Fpg E. coli и определения контактов белка с фосфатными группами в ДНК использовали набор реакционноспособных аналогов субстратов, содержащих в своей структуре одновременно остаток 8-OG и тризамещенные пирофосфатные межнуклеотидные группировки в различных положениях по отношению к нему. Модифицированные ДНК-дуплексы были получены методом химического лигирования. Изучены свойства и реакционная способность синтезированных аналогов субстратов, исследовано их взаимодействие с Fpg E. coli, определены константы диссоциации ДНК-белковых комплексов. Изучено каталитическое расщепление модифицированных ДНК-дуплексов Fpg и найдены новые негидролизуемые аналоги субстратов этого фермента. Подобраны оптимальные условия для ковалентного связывания реакционноспособных ДНК-дуплексов с ферментом и получены специфические ковалентные ДНК-белковые комплексы, что позволило определить контакты нуклеофильных аминокислот Fpg E. coli с фосфатными группами ДНК.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2000, том 41, № 6, стр. 375-379