Д.Л. Атрошенко, И.В. Голубев, С.С. Савин, В.И. Тишков
Влияние заменыостатков Met на остаток Leu на
каталитические свойства, окислительную и температурную стабильности оксидазы D-аминокислот
дрожжей
Реферат
Окислительная стабильность ферментов определяется в первую
очередь остатками Cys и Met. В случае оксидазы D-аминокислот (DAAO,
КФ 1.4.3.3) из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) методом
направленного мутагенеза получены три мутеина с точечными заменами остатка Met
на остаток Leu. Выбор положений для введения замены сделан на основе множественного
выравнивания аминокислотных последовательностей DAAO из разных источников, а
также анализа трехмерной структуры TvDAAO. Для полученных мутантов изучены
каталитические свойства, а также температурная и окислительная стабильность. Во
всех случаях замена привела к изменению у мутантных ферментов профиля
субстратной специфичности. Наблюдается заметное увеличение констант Михаэлиса
для небольших субстратов и уменьшению КМ для D-аминокислот с
объемным боковым радикалом. Показано, что в результате одной из замен
происходит повышение температурной стабильности TvDAAO в 2–3 раза по сравнению
с ферментом дикого типа. Разработана методика определения стабильности TvDAAO к
действию пероксида водорода. Изучена окислительная стабильность фермента дикого
типа и полученных мутантных TvDAAO. Установлено, что во всех случаях замена
остатка Met на остаток Leu незначительно повлияла на окислительную стабильность
фермента.
Ключевые слова: оксидаза
D-аминокилот, Trigonopsis variabilis, направленный мутагенез,
окислительная стабильность, каталитические свойства, температурная
стабильность.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2016, том 57, № 4, стр. 253-263
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2016
|