Д.Л. Атрошенко, С.А. Зарубина, М.Д. Шеломов, И.В. Голубев, С.С. Савин, В.И. Тишков

Получение и характеристика многоточечных мутантов оксидазы D-аминокислот с улучшенными стабильностью и активностью

Оксидаза D-аминокислот (DAAO) – FAD-содержащая оксидоредуктаза, способная стереоспецифично окислять D-аминокислоты с образованием α-кетокислот, иона аммония и пероксида водорода. Наиболее важным биотехнологическим процессом с использованием DAAO является получение 7‑аминоцефалоспорановой кислоты (7-АЦК) из цефалоспорина С. Из 7-АЦК затем получают цефалоспориновые антибиотики различных поколений. Ранее нами были получены мутантные DAAO из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) с точечными аминокислотными заменами, обладающие повышенной термостабильностью или улучшенными каталитическими свойствами в реакции окисления цефалоспорина С. В данной работе получены две новые мутантные TvDAAO с заменой двух и четырех аминокислотных остатков. Каталитические константы для этих мутантных TvDAAO в реакции окисления цефалоспорина С в 1,8 и 4 раза выше, чем соответствующее значение для фермента дикого типа. Объединение замен привело к увеличению температурной стабильности в 2–3 раза для обеих мутантных форм.
Ключевые слова: оксидаза D-аминокислот, цефалоспорин С, направленный мутагенез, рациональный дизайн, кинетические свойства, стабильность.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2017, том 58, № 5, стр. 230-236