Н.В. Комарова, С.И. Глухов, М.С. Андрианова, А.Е. Кузнецов

Использование флуоресцентных меток Cу3 и Cу5 для защиты цепи ДНК от деградации под воздействием λ-экзонуклеазы

Экзонуклеаза фага λ расщепляет 5′-фосфорилированную цепь двухцепочечной ДНК в направлении 5′–3′. В данной работе впервые изучена активность фермента по отношению к ДНК-субстратам, содержащим на 5′-концах флуоресцентные метки Cy3 и Cy5. С использованием методики флуоресцентного измерения активности экзонуклеазы показано, что двухцепочечная ДНК, оба 5′-конца которой содержат данные флуорофоры, не разрушается под действием экзонуклеазы фага λ. С помощью электрофоретического разделения ДНК в полиакриламидном геле изучен процесс получения одноцепочечной ДНК из двухцепочечных предшественников, содержащих различные метки на 5′-концах. Показано, что введение флуорофоров Cy3 и Cy5 на 5′-конец цепи ДНК защищает эту цепь от повреждения ферментом как в дуплексе, так и в одноцепочечной форме, и эти метки могут быть использованы для получения флуоресцентно-меченной одноцепочечной ДНК.
Ключевые слова: экзонуклеаза фага λ, флуоресцентная метка, получение одноцепочечной ДНК.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2018, том 59, № 2, стр. 92-100