И.Г. Синельников, И.Н. Зоров, К.С. Болотова, А.П. Синицын, А.М. Рожкова

Клонирование и экспрессия новой хитиназы из хищных растений Drosera capensis

Клонирован новый ген chi19, кодирующий хитиназу хищного растения Drosera capensis, принадлежащую 19-му семейству гликозилгидролаз. Аминокислотная последовательность транслированного фермента составляет 325 а/к и состоит из четырех функциональных частей: N-концевой сигнальной последовательности, каталитического и хитинсвязываюшего доменов, которые были соединены –S–P-линкером. Проведена экспрессия гена chi19в системе бактерий E. coli в двух формах: с хитинсвязывающим доменом и без него. Для обоих вариантов фермента осуществлен рефолдинг и получены гомогенные растворимые формы. Хитиназы обладают выраженной субстратной специфичностью к кристаллическому хитину, pH-оптимум ферментов находится в диапазоне от 5,0 до 5,5; Т-оптимумы обеих форм ферментов составляли 52–55 °С. Каталитическая активность полноразмерной формы хитиназы составляла 360 ед./г. Удаление хитинсвязываюшего домена приводит к уменьшению каталитической активности на 64%.
Ключевые слова: хитиназа, Drosera capensis, TAIL-PCR.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2020, том 61, № 5, стр. 361-368